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1 儀器與試劑

1200液相色譜儀系列，由 G1312A液相泵、G1316A柱溫箱、G1315B二極管陣列檢測(cè)器、7725手動(dòng)進(jìn)樣閥和25  微量進(jìn)樣器組成；HJ．2磁力加熱攪拌器；PHS 3C型酸度計(jì)。利多卡因、布比卡因均為鹽酸鹽注射液，丁卡因?yàn)辂}酸鹽粉末。乙腈為色譜純，其它試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為二次蒸餾水。含鹽酸利多卡因、鹽酸布比卡因和鹽酸丁卡因的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液及由其稀釋而成的標(biāo)準(zhǔn)溶液均置于4cc冰箱中保存。

健康人血漿從湖南中心血站購(gòu)得（冰箱中一4O℃冷凍保存不超過(guò) 3星期），含利多卡因、布比卡因和丁卡因的加樣血漿于4℃冰箱中保存，保存時(shí)間不超過(guò) 24 h。病人血樣來(lái)自長(zhǎng)沙市第四醫(yī)院，病人首先被一次性注入布比卡因 10．9 mg（腰麻），然后在 0．5 h內(nèi)分 4次注入利多卡因，累計(jì)量為282．9 mg （硬膜外麻醉），從實(shí)施麻醉開始計(jì)時(shí)，2 h進(jìn)行*次采樣，7 h進(jìn)行第二次采樣。 局部麻醉劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液 、加樣血漿溶液及病人血漿溶液，以0．1 mol／L NaOH溶液調(diào)節(jié) pH值至 1 1，作為本實(shí)驗(yàn)的料液。

2．1 色譜條件

色譜柱：Spherigel C 柱（5 Ixm，150 mm×4．6 mm i．d．）（大連江申分離科學(xué)技術(shù)公司），流速為

1．0          mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm，進(jìn)樣量為 1 IxL；流動(dòng)相：750 mL 0．025 mol／L三乙胺水溶液，以磷酸調(diào)pH 3．0，用 0．45 Ixm濾膜過(guò)濾，與 250 mL乙腈混勻，脫氣 10 min備用。

2．2 實(shí)驗(yàn)方法

液．液．液微萃取體系含料液相、有機(jī)相和接受相 3個(gè)液相（如圖1）。在萃取瓶中加入一個(gè)微型攪拌磁子和 1 mL、pH為 l1．0的料液，緩慢加入200 IxL苯，再用25  微量進(jìn)樣器抽取 ILL0．2 mol／L的鹽酸溶液，微量進(jìn)樣器固定在鐵夾上，其針尖浸入到有機(jī)溶劑中，

小心按下微量進(jìn)樣器的活塞，使反萃相在有機(jī)相中形成一個(gè)小液滴懸掛在針尖上。開啟攪拌器，攪拌速度為 250 r／min，萃取 45 min后，將反萃相小心抽回進(jìn)樣器，直接進(jìn)樣到液相色譜體系中進(jìn)行分析。以萃取結(jié)束后分析物在接受相中的濃度和萃取開始前分析物在料液相的初始濃度之比計(jì)算富集因子。

3．1實(shí)際血樣的檢測(cè)

標(biāo)準(zhǔn)混合溶液的色譜圖和加樣血漿經(jīng)過(guò)液一液一液微萃取后的色譜圖分別見(jiàn)圖4（A）和圖4（B）。由圖4（A）和圖4（B）可知，局麻藥通過(guò) LLLME后得到了很大程度的富集。以此為依據(jù)，本實(shí)驗(yàn)在優(yōu)化條件下，對(duì)實(shí)際病人的血樣進(jìn)行了測(cè)定，圖4（c）和圖4（D）分別是實(shí)施利多卡因、布比卡因麻醉7 h時(shí)的病人血漿直接進(jìn)樣的色譜圖和其 LLLME色譜圖。由圖4（c）可知，由于病人血樣復(fù)雜，且局麻藥的濃度較低，無(wú)法直接進(jìn)行測(cè)定。比較圖4（D）和圖4（c）可知，LLLME可以消除血漿本身對(duì)局麻藥檢測(cè)的干擾，且局麻藥的濃度經(jīng)微萃取后得到了明顯富集。測(cè)得2 h后所采血樣中的利多卡因濃度為1．06 mg／L，布比卡因濃度為0．22 mg／L；7 h后所采血樣中的利多卡因濃度為0．28 mg／L，布比卡因濃度為0．06 mg／L。

說(shuō)明該 LLLME—HPLC方法消除干擾能力強(qiáng)，靈敏度高，可以用于實(shí)際血漿樣品中局麻藥的測(cè)定。